FOSFATASA ALCALINA(ALPA)

La fosfatasa alcalina leucocitaria cataliza la hidrólisis de esteres fosfóricos en medio alcalino. El 1 - naftol liberado a partir del fosfato de 1 - naftilo se acopla con una sal de diazonio para dar un azulcolorante pardo, que precipita en la célula de acuerdo con la localización y la actividad de la fosfatas alcalina en la célula.
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Este es el material que vamos a utilizar en la práctica.

Este es el material que vamos a utilizar en la práctica.

Introducimos el porta en la tinción de meyer durante 5 minutos.

Introducimos el porta en la tinción de meyer durante 5 minutos.

Observamos, con el objetivo de inmersión, el precipitado pardo negruzco que  corresponde a la fosfatasa alcalina.

Observamos, con el objetivo de inmersión, el precipitado pardo negruzco que corresponde a la fosfatasa alcalina.

Enjuagamos 5 minutos con agua del grifo para eliminar el exceso de tinción de meyer que nos entorpecería la observación al microscopio.

Enjuagamos 5 minutos con agua del grifo para eliminar el exceso de tinción de meyer que nos entorpecería la observación al microscopio.

Introducimos el porta en la cubeta que tenemos con la tinción preparada anteriormente. Lo dejamos 30 minutos y lavamos.

Introducimos el porta en la cubeta que tenemos con la tinción preparada anteriormente. Lo dejamos 30 minutos y lavamos.

Introducimos la extensión en solución fijadora(formol-etanol 9/1) durante 3 minutos y lavamos 10 segundos con agua del grifo. Secamos bien al aire.

Introducimos la extensión en solución fijadora(formol-etanol 9/1) durante 3 minutos y lavamos 10 segundos con agua del grifo. Secamos bien al aire.

Preparamos la solución C pasando el contenido de un frasco del reactivo 3 a un matraz Erlenmeyer enjuagando con 45 mL de la solución A, agitar intensamente durante 2 minutos y filtrar a través de paso rápido a la cubeta de tinción pasando la solución B.

Preparamos la solución C pasando el contenido de un frasco del reactivo 3 a un matraz Erlenmeyer enjuagando con 45 mL de la solución A, agitar intensamente durante 2 minutos y filtrar a través de paso rápido a la cubeta de tinción pasando la solución B.

Preparamos la solución B pasando el contenido de un frasco el reactivo 2 a la cubeta de tinción enjuagando con 15 mL de la solución A.

Preparamos la solución B pasando el contenido de un frasco el reactivo 2 a la cubeta de tinción enjuagando con 15 mL de la solución A.

Preparamos la solución A disolviendo 4 cucharadas rasas del reactivo en 100 mL de agua destilada.

Preparamos la solución A disolviendo 4 cucharadas rasas del reactivo en 100 mL de agua destilada.

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