Determinación del factor Rh por PCR

Collection by María del Rocío Vargas

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El objetivo de este experimento es la determinación del Rh utilizando para ello las técnicas de la PCR y de la electroforesis de ADN. Para ello, aislaremos el ADN de nuestra saliva y lo utilizaremos para llevar a cabo la reacción de PCR. La base de esta práctica es la amplificación de un fragmento del gen D. Los individuos Rh + producirán dos fragmentos de diferentes tamaños, mientras que los individuos Rh - producirán un único fragmento.

María del Rocío Vargas
26. Conectar fuente de alimentación durante 1h Vacuums, Home Appliances, Lab, House Appliances, Vacuum Cleaners, Appliances

26. Conectar fuente de alimentación durante 1h

25. cargamos en el primer pocillo de la placa de agarosa (con la mezcla anteriormente preparada). Añadimos en la placa de agarosa C+, C- y la muestra. Tray, Home Decor, Licence Plates, Lab, Homemade Home Decor, Decoration Home, Board, Interior Decorating

25. cargamos en el primer pocillo de la placa de agarosa (con la mezcla anteriormente preparada). Añadimos en la placa de agarosa C+, C- y la muestra.

23. Llenar la cubeta con el tampon comprobando que el tampon cubre completamente la placa Ice Cube Trays, Licence Plates, Buckets, Cover, Lab

23. Llenar la cubeta con el tampon comprobando que el tampon cubre completamente la placa

18.Añadir 600 microlitros de etanol e invertimos el tubo varias veces, hasta disolver el pellet de ADN. Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 1 minuto. Eliminar el etanol con cuidado. Invertir el tubo sobre el papel absorbente limpio para eliminar el resto de líquido y dejar secar al aire unos minutos. Factors, Ethanol Fuel, Dna, Paper Envelopes

18.Añadir 600 microlitros de etanol e invertimos el tubo varias veces, hasta disolver el pellet de ADN. Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 1 minuto. Eliminar el etanol con cuidado. Invertir el tubo sobre el papel absorbente limpio para eliminar el resto de líquido y dejar secar al aire unos minutos.

17.Descartar el sobrenadante e invertir el tubo en un papel limpio para eliminar restos de líquido. Backrest Pillow, Pillows, Paper Envelopes, Cushion, Cushions, Throw Pillows

17.Descartar el sobrenadante e invertir el tubo en un papel limpio para eliminar restos de líquido.

16.Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 2 minutos Washing Machine, Home Appliances, House Appliances, Appliances, Washers

16.Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 2 minutos

15.Verter el sobrenadante en un tubo con 600 microlitros de isopropanol. Mezclar suavemente por inversión del tubo unos 40 - 50 veces. Factors, Ethanol Fuel, Dna, Paper Envelopes

15.Verter el sobrenadante en un tubo con 600 microlitros de isopropanol. Mezclar suavemente por inversión del tubo unos 40 - 50 veces.

14.Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 5 minutos. Se formará un denso pellet en el fondo del tubo. Washing Machine, Home Appliances, House Appliances, Appliances, Washers

14.Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 5 minutos. Se formará un denso pellet en el fondo del tubo.

27. Al terminar la electroforesis, llevar la placa de agarosa al transiluminador y enfocamos las bandas de ADN y leemos los resultados. Monitor, Electronics, Phone, Licence Plates, Dna, Bands, Telephone, Phones

27. Al terminar la electroforesis, llevar la placa de agarosa al transiluminador y enfocamos las bandas de ADN y leemos los resultados.

22. Preparación del tampón TBE-5X (En un vaso de precipitado de 1000 mL y con ayuda de un imán disolver los reactivos. Al disolver los reactivos, se echa todo en una probeta).Hacemos la preparación de gel de agarosa añadiendo por último 16 microlitros de SYBR - green. Plastic Cutting Board, Vase, Magnets

22. Preparación del tampón TBE-5X (En un vaso de precipitado de 1000 mL y con ayuda de un imán disolver los reactivos. Al disolver los reactivos, se echa todo en una probeta).Hacemos la preparación de gel de agarosa añadiendo por último 16 microlitros de SYBR - green.

21.Pasar los tubos al termociclador, que previamente ha sido programado de acuerdo con los siguientes valores:      10 minutos a 95 ºC;     35 ciclos = 1 minuto a 95 ºC ; 1 minuto a 64 ºC ; 1 minuto a 72 ºC.     10 minutos a 72 ºC Nintendo Consoles

21.Pasar los tubos al termociclador, que previamente ha sido programado de acuerdo con los siguientes valores: 10 minutos a 95 ºC; 35 ciclos = 1 minuto a 95 ºC ; 1 minuto a 64 ºC ; 1 minuto a 72 ºC. 10 minutos a 72 ºC

20-Marcar un tubo como C+, C- y M1, M2 y así sucesivamente. Dispensar en un tubo 0'2 mL:      -Control negativo = 22'5 microlitros de mix PCR + 2'5 microlitros agua destilada. Mezclar bien.     -Control positivo = 22'5 microlitros mix PCR + 2'5 microlitros C+. Mezcla bien.   -  Muestra 5= 22'5 microlitros mix PCR + 2'5 microlitros de ADN. Mezclar bien. Control, Plastic Cutting Board, Distilled Water, Dna

20-Marcar un tubo como C+, C- y M1, M2 y así sucesivamente. Dispensar en un tubo 0'2 mL: -Control negativo = 22'5 microlitros de mix PCR + 2'5 microlitros agua destilada. Mezclar bien. -Control positivo = 22'5 microlitros mix PCR + 2'5 microlitros C+. Mezcla bien. - Muestra 5= 22'5 microlitros mix PCR + 2'5 microlitros de ADN. Mezclar bien.

19.Añadir 200 microlitros del reactivo hidratante y resuspendemos el pellet mediante pipeteo. Almacenar el ADN hidratado en el refrigerador conservado a -20 ºC. Bean Bag Chair, Furniture, Home Decor, Refrigerator, Dna, Moisturizer, Homemade Home Decor, Bean Bag Chairs, Home Furnishings

19.Añadir 200 microlitros del reactivo hidratante y resuspendemos el pellet mediante pipeteo. Almacenar el ADN hidratado en el refrigerador conservado a -20 ºC.

13. Añadir 200 microlitros de reactivo precipitante de proteínas, lo llevamos al vórtex y agitamos a alta velocidad durante 20 - 30 segundos para mezclarlo uniformemente. Hands

13. Añadir 200 microlitros de reactivo precipitante de proteínas, lo llevamos al vórtex y agitamos a alta velocidad durante 20 - 30 segundos para mezclarlo uniformemente.

12. Incubar durante 10 minutos a 37 ºC. Agitarel tubo suavemente por inversión cada 2 minutos Factors

12. Incubar durante 10 minutos a 37 ºC. Agitarel tubo suavemente por inversión cada 2 minutos

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